序列構成，氮吹儀價格莖的一端連上一個熒光分子，另一端連上一個淬滅分子（ :6,(5#,8）。當無靶序列時，分子信標 呈莖環結構，熒光分子和淬滅分子非常接近，熒光分子發出的熒光被淬滅分子吸收并以熱的形式散發，檢 測不到熒光信號。當有靶序列存在時，分子信標的環序列和靶序列特異的結合，形成的雙鏈比莖環結構更 穩定，熒光分子和淬滅分子分開，熒光分子發出的熒光不被淬滅分子吸收，則可檢測到熒光。 二、分子雜交的方法 !!分子雜交分為固相雜交、液相雜交和固相液相雜交。固相液相雜交是把欲檢測的核酸樣本或探針 先結合到固相載體上，再與液體中的探針或核酸樣品進行雜交反應，漂洗去除未反應的探針或核酸樣品， 經檢測雜交信號，判斷雜交結果。 !!（一）斑點雜交 !!斑點雜交（)$% &4$% #;&8’)’<7%’$(）是將 =>?或 ->?變性后直接點樣在硝酸纖維素膜上，探針放在雜 交液內進行雜交。方法簡便、快速、靈敏，用于特定基因的定性分析。 ! ! ->?點陣（->? 7887;）是將相關的探針按順序點在硝酸纖維素膜上，待檢樣品放在雜交液內，檢查樣 品中的核酸能和哪一個探針雜交。 !!基因芯片（*,(, 5#’"@）是將探針點在硅片上，待測樣品放在雜交液內進行雜交，借助計算機判斷樣品 中的核酸能和哪一個探針雜交。 ->?點陣和基因芯片點在固相上的是探針的序列，沒有進行標記。待測 核酸樣品在雜交前進行標記。 !!斑點雜交、 ->?點陣、基因芯片主要是確定待檢樣品中有沒有所要的核酸。 !!（二）原位雜交 !!原位雜交（’( @’%6 #;&8’)’<7%’$(）是用核酸探針與細胞和組織切片中的核酸進行雜交并

對其進行檢測 的方法。分為細胞原位雜交和組織切片原位雜交。原位雜交為核酸序列在細胞水平的定位和測定提供了 方法，可確定含有特定核酸序列的細胞類型和數目，可檢出基因和基因產物的亞細胞定位。查明染色體中 特定基因的位置，為染色體病的診斷提供方法。 !!（三）轉移印跡技術 !!轉移印跡技術是將電泳和分子雜交技術結合起來的一種試驗方法。根據檢測樣品種類的不同又分為 三類： !!（.）A$6%#,8(印跡雜交（@$6%#,8( &4$%%’(*）! ->?分子經限制酶切，在瓊脂糖凝膠上電泳使 ->?片段 依據相對分子質量大小分開，再將電泳結果從凝膠中轉印到硝酸纖維素膜上，經固定和變性后，在膜上與 探針進行雜交，確定電泳條帶中哪一條是所要的 ->?。開始將瓊脂糖上的 ->?條帶轉移到硝酸纖維素 膜上，采用的是用吸墨汁紙吸水（&4$%%’(*）的方法（見圖 .9 9?）。英國愛丁堡大學的 B)C’( A$6%#,8(博士 第十七章 /基因技術!"! 建立了此方法， !"#$%&’(印跡雜交由此

得名。現在將 )*+轉移到硝酸纖維素膜上多采用轉移電泳的方法 （見圖 ,--.）。 圖 ,--/ !"#$%&’(印跡雜交 //（0）*"’$%&’(印跡雜交（ ("’$%&’( 12"$$3(4）/ *"’$%&’(印跡雜交是經典的 5*+分析法。操作方法和 !"#$%&’(印跡雜交方法基本相似，是將 5*+經電泳分開后轉移到硝酸纖維素膜上進行雜交。 //（6）7&8$&’(印跡雜交（9&8$&’( 12"$$3(4）/ 7&8$&’(印跡雜交是將蛋白質經聚丙烯酰胺凝膠電泳分離 后轉移到硝酸纖維素膜上，檢測哪一種蛋白質能和抗體反應，也叫免疫印跡技術。 第三節 /聚合酶鏈反應 //聚合酶鏈反應（:"2;<&’=8& >%=3( ’&=>$3"(，?@5）是一種在體外由引物介導的 )*+酶促合成反應，也叫 基因擴增技術，類似體內的 )*+復制過程。主要是利用 )*+聚合酶依賴 )*+模板的特性，在一對引物 間誘發聚合酶反應。整個過程包括模板變性、模板與引物退火和引物延伸三個步驟。 ?@5具有特異性 強、靈敏度高、操作簡便、對待檢材料質量要求低等特點，能夠快速擴增任何目的基因。 //開始進行聚合酶鏈反應時用的聚合酶是大腸桿菌 )*+聚合酶 !的 A2&("9片段。由于此酶不耐熱， 在 )*+變性過程的高溫中失活，需要不斷的加入新的酶。